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Un exemple concret
Pour rechercher des anticorps contre un virus, on fixe des antigènes viraux au fond des puits d'une microplaque. On ajoute le sérum du patient, puis un anticorps anti-anticorps humain couplé à la peroxydase. Après ajout du substrat, un puits coloré signale un sérum positif.
Le piège à éviter
Oublier les lavages entre les étapes. Sans eux, l'anticorps marqué non fixé resterait dans le puits et donnerait une coloration même en l'absence de la molécule recherchée : un faux positif.
Pour aller plus loin
L'ELISA se déroule dans une microplaque de 96 puits en plastique, sur lesquels une molécule est adsorbée. Les étapes alternent incubations et lavages : fixation de l'antigène ou de l'anticorps de capture, saturation des sites libres par une protéine neutre pour éviter les fixations non spécifiques, ajout de l'échantillon, ajout de l'anticorps de détection couplé à une enzyme, puis ajout du substrat. Une solution d'arrêt stoppe la réaction enzymatique avant la lecture.
On distingue plusieurs formats. L'ELISA direct détecte un antigène fixé grâce à un anticorps marqué. L'ELISA indirect détecte des anticorps présents dans un sérum grâce à un anticorps secondaire marqué, dirigé contre les anticorps de l'espèce étudiée. L'ELISA en sandwich capture l'antigène entre deux anticorps qui reconnaissent deux épitopes différents, ce qui augmente la spécificité. Les enzymes couramment utilisées sont la peroxydase et la phosphatase alcaline.
La lecture se fait au spectrophotomètre de microplaque : l'absorbance du produit coloré est proportionnelle à sa concentration selon la loi de Beer-Lambert. Pour un dosage quantitatif, on réalise une gamme d'étalonnage avec des concentrations connues et on reporte l'absorbance de l'échantillon sur la courbe. Chaque série comprend un témoin positif et un témoin négatif pour valider le test. L'ELISA est utilisé pour le dépistage d'infections, les tests de grossesse en laboratoire ou la détection d'allergènes, et illustre en STL le lien entre immunologie et enzymologie.
Ne pas confondre
- Test rapide immunochromatographique : Le test rapide utilise une bandelette et des particules colorées, sans enzyme ni lecteur ; l'ELISA repose sur une réaction enzymatique et une mesure d'absorbance.
- PCR : La PCR détecte le matériel génétique d'un agent pathogène ; l'ELISA détecte des protéines, antigènes ou anticorps.
- Agglutination : L'agglutination montre la formation d'amas visibles à l'œil nu ; l'ELISA révèle le complexe antigène-anticorps grâce à une enzyme.
Dans ta copie
Pour savoir si le patient a été en contact avec le virus, nous avons réalisé un ELISA indirect. Les antigènes viraux sont fixés au fond des puits. Si le sérum contient des anticorps spécifiques, ceux-ci se lient aux antigènes. Après lavage, un anticorps secondaire anti-immunoglobulines humaines couplé à la peroxydase se fixe sur ces anticorps. L'ajout du substrat produit alors une coloration. L'absorbance du puits de l'échantillon, supérieure au seuil défini par le témoin négatif, permet de conclure que le sérum est positif.
À retenir
- L'ELISA détecte un antigène ou un anticorps grâce à leur liaison spécifique.
- Un anticorps couplé à une enzyme révèle le complexe par une coloration.
- Les lavages éliminent les molécules non fixées et évitent les faux positifs.
- L'absorbance mesurée permet un dosage grâce à une gamme d'étalonnage.
Teste-toi
STL · question corrigée
Dans un ELISA, quel est le rôle de l'enzyme couplée à l'anticorps ?
Voir la réponse
Réponse A. L'enzyme catalyse la transformation d'un substrat incolore en produit coloré, ce qui rend visible et mesurable la formation du complexe.
STL · question corrigée
Quel format d'ELISA utilise-t-on pour rechercher des anticorps dans le sérum d'un patient ?
Voir la réponse
Réponse C. L'ELISA indirect fixe l'antigène sur la plaque, capte les anticorps du sérum, puis les révèle avec un anticorps secondaire marqué.
Questions fréquentes
À quoi sert le témoin négatif ?
Il montre le signal obtenu en l'absence de la molécule recherchée. On fixe à partir de lui le seuil au-delà duquel un échantillon est considéré comme positif.
Pourquoi sature-t-on la plaque avec une protéine neutre ?
Elle occupe les sites du plastique restés libres. Les anticorps ajoutés ensuite ne peuvent donc pas s'y fixer au hasard, ce qui limite le bruit de fond.
Notions liées
Pour réviser tout le chapitre, va sur la page STL, ou retrouve toutes les définitions dans le lexique du bac. Dans l'application, les quiz reprennent ces notions sur le programme de ta série.